Information

Restriktionsenzymer: Molekylära saxar


Från 1970-talet var det lättare att analysera DNA-molekylen med isolering av restriktionsenzym.

Dessa enzymer är endonukleaserdvs inuti (därav prefixet endo- inuti) DNA-molekyler genom att skära dem på väl definierade platser.

Dessa är enzymer som normalt produceras av bakterier som har förmågan att försvara dem från att invadera virus. Dessa ämnen "pockar" alltid DNA-molekylen vid vissa punkter, vilket leder till produktion av fragment som innehåller limspetsar, som kan binda till andra ändar av DNA-molekyler som har skurits med samma enzym.

Inom genteknik tjänar att erhålla DNA-fragment till att skapa, in vitro (i provrör eller laboratorium), nya molekyler, skärning och klistra in olika informationsbitar.

En av de första restriktionsenzymerna som isolerades var EcoRI, producerad av bakterierna Escherichia coli. Detta enzym känner igen bara sekvensen GAATTC och agerar alltid mellan G och den första A.

Den "klippta" platsen, platsen för ett enzym, är känd som målsidan. Du kanske frågar varför detta enzym inte verkar på själva bakteriens DNA? Detta beror inte på förekomsten av andra skyddande enzymer som förhindrar verkan av restriktionsenzymer på bakteriens genetiska material.

den restriktionsenzymer känner igen och verkar på specifika DNA-sekvensergenom att katalysera förstörelsen av en fosfodiesterbindning mellan två på varandra följande baser bundna till vissa baser. Nukleotiderna mellan vilka enzymet skär, dvs mellan vilka det främjar hydrolys, ligger inom samma specifika igenkänningssekvenser (se bild).

Varje DNA-molekyl kan bestå av flera upprepningar av GAATTC-sekvensen över hela dess längd. Därför, vid kontakt med EcoRI-enzymet, kan DNA-strängen klyvas "skäras" på flera ställen, vilket genererar flera bitar av olika storlekar.

Vi kommer att se nedan hur dessa olika klyvda DNA-bitar separeras.